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2011-10-24

Western blot结果中无信号或显示信号弱原因及建议

●检测样本不表达目的蛋白选择表达量高的细胞作为阳性对照,用于确定检测样本是否为阴性。  
●检测样本低表达目的蛋白提高上样量,裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。 
●转移不完全或过转移可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头;适当调整转膜的时间和电流。 
●抗体不能识别测试种属的相关蛋白购买抗体前应当认真阅读抗体说明书,确定其是否能够交叉识别测试种属的对应蛋白。 
●一抗孵育时间不足建议4℃结合过夜。 
●二抗与一抗不匹配选择针对一抗来源的种属的抗体。 
●洗膜过度洗膜时间不宜过长,加入的去垢剂不宜过强或过多,建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20。
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